Desenvolvimento de sistema microemulsionado para transfecção de RNA interferente

Abstract

Interferência por RNA (RNAi) é um mecanismo natural de silenciamento de genes conservados em células de plantas e animais. É uma ferramenta versátil com aplicações desde a genética reversa até o mapeamento de alvos para drogas e, além disso, tem se tornado um assunto de grande interesse devido ao seu potencial terapêutico para uma variedade de doenças, incluindo as malignas, as infecciosas e as autoimunes, pela supressão de sequências gênicas específicas. Aplicações cutâneas de pequenos RNAs regulatórios (siRNA) estão emergindo devido à grande demanda de tratamentos efetivos para várias desordens na pele. Este órgão é uma importante rota para transporte de drogas por ser facilmente acessível e permitir tratamento local e confinado, com acesso direto às células-alvo e menor absorção sistêmica das moléculas de siRNA. A terapia com RNAi requer um veículo para o transporte in vivo, devido à fragilidade das moléculas de siRNA quando em contato com as variações do meio e as enzimas de degradação. Por isso a importância de sistemas nanocarreadores, que além de fornecer um mecanismo de liberação controlada, facilita a passagem do siRNA intacto através da pele. As microemulsões são capazes de aumentar a permeação cutânea, pela habilidade de interagir com os lipídeos da pele, e a eficácia terapêutica de diversos fármacos, com redução da dose administrada e dos potenciais efeitos adversos. Até o momento, não existem estudos sobre o encapsulamento de siRNA em sistemas microemulsionados para terapia cutânea do fotoenvelhecimento. Dessa forma, o presente trabalho formulou e caracterizou microemulsões como veículo de siRNA específico para uma metaloproteinase de matriz (MMP) para futura aplicação tópica como um nanocosmético. Um diagrama de fases pseudoternário (DFPT) foi obtido utilizando uma fase aquosa de propilenoglicol (PPG) e água (A), Span 80 e Tween 80 como o sistema tensoativo/cotensoativo e o óleo de canola como fase oleosa (O). Após obtenção da região de microemulsão (ME), o polímero catiônico polietilenoimina (PEI) 5% foi incorporado ao sistema selecionado, em sua fase aquosa, sendo este comumente utilizado em aplicações de transporte de genes. As ME foram avaliadas quanto ao pH, condutividade, índice de Refração (IR), microscopia eletrônica de transmissão (MET), calorimetria exploratória diferencial (DSC) e estabilidade, evidenciando ser um sistema do tipo A/O. Ademais, o potencial de encapsulação do siRNA foi determinado por eletroforese em gel de agarose. As microemulsões catiônicas podem ser úteis para encapsulação de moléculas carregadas negativamente, aumentando a permeação e liberação cutânea. Esta proposta fornecerá uma nova estratégia de prevenção do fotoenvelhecimento, com o desenvolvimento de um produto com alto valor biotecnológico.