Amplificação do vetor de clonagem pGEX-2t em células E. coli quimio-competentes e digestão do vetor com a enzima de restrição Sma I

Abstract

O presente trabalho teve por objetivo estabelecer procedimentos necessários à clonagem e expressão da proteína E da dengue. Realizou-se amplificação in vitro do gene da proteína E dos sorotipos 2 e 4 da dengue por meio de reação em cadeia da polimerase (PCR). A digestão do vetor de clonagem pGEX-2T foi realizada com a enzima de restrição Sma I com a subsequente remoção de fósforo das extremidades 5’ do vetor digerido utilizando-se fosfatase alcalina. Foram geradas células quimio-competentes a partir de Escherichia coli BL21, as quais foram posteriormente transformadas com a utilização do vetor pGEX-2T por meio de choque térmico. A PCR para o gene da proteína E apresentou necessidade de otimização. A digestão do vetor com a enzima Sma I ocorreu conforme esperado, bem como a geração de células quimio-competentes e a transformação bacteriana. Com a realização da presente pesquisa, foi possível estabelecer procedimentos até então não disponíveis para esta linha de pesquisa na Universidade Estadual da Paraíba.