Efeito da laserterapia de baixa intensidade na proliferação de células-tronco isoladas da papila apical humana

Abstract

Este estudo teve por objetivo avaliar o efeito da laserterapia de baixa intensidade (LBI) no aumento do metabolismo das células-tronco isoladas da papila apical humana, stem cells apical papilla (SCAPs), por meio de imunofluorescência, bem como verificar se a LBI intensifica a proliferação das mesmas por meio da imunoexpressão do Ki-67. Todos os procedimentos antecedentes à estocagem das células seguiram os princípios éticos regidos pelo Código de Helsinque e foram submetidos ao comitê de ética em pesquisa da Uiversidade Federal de Goiás aprovado sob o número (CAAE): 44993015800005083. Os experimentos foram realizados com células isoladas de quatro pacientes distintos, previamente caracterizadas e cultivadas. As células foram irradiadas com um aparelho de Laser semicondutor (InGaAlP), com potência de 100mW, comprimento de onda de 660nm, de ação contínua. Para o ensaio de Imunofluorescência, utilizou-se o Mitotraker Red (Molecular Probes®, MP-07512, Invitrogen©) na concentração de 100mM. A técnica consistiu na aplicação de um fluorocromo de coloração vermelha que permeabilizava a célula e se fixava na superfície de mitocôndrias ativas; foi comparada a diferença de fluorescências entre os grupos controle não tratado (CNT), grupo irradiado com ensaio de imunofluorescência sem intervalo de incubação (6JT0) e o grupo irradiado com ensaio de imunofluorescência com intervalo de 24h de incubação (6J24h) e feita a avaliação, observando que quanto maior o metabolismo mitocondrial, maior a fixação do fluorocromo a sua superfície. Com o objetivo de analisar o mecanismo de ação da LBI sob as SCAPs, foi realizada técnica de imunocitoquímica. Foi utilizado o marcador Ki-67; a fim de verificar se havia diferença na regulação da expressão desta proteína nas células irradiadas e não irradiadas. O ensaio foi repetido em outras linhagens isoladas da amostra. Para a análise de imunocitoquímica, eram separados dois grupos de células de cada paciente, sendo um grupo controle não tratado (CNT) e um grupo irradiado com laser vermelho (6J). Os percentuais de imunoreatividade foram registrados em planilha e posteriormente submetidos a análise estatística, através de uma análise descritiva com obtenção da mediana e desvio padrão de todos os grupos estudados. Para verificar se houve diferença estatisticamente significativa na imunoreatividade ao Ki-67, entre os grupos de células irradiados e não irradiados, foi utilizado o teste de Mann-Whitney e foi adotada significância de 5%. As células irradiadas, com laser vermelho de baixa intensidade parecem apresentar positividade quanto ao aumento da proliferação, porém não houve significância estatística quando comparadas aos grupos controle. Assim, conclui-se que a LBI foi capaz de aumentar o metabolismo mitocondrial das células- tronco isoladas da papila apical, associado a um aumento das medianas do marcador Ki-67; o que pode indicar que a LBI estimula a proliferação das SCAPs.