Padrões de distribuição de bandas CMA/DAPI em Epidendrum L. subgênero Amphiglotium e híbridos naturais interespecíficos

Abstract

Nas últimas décadas, as técnicas de bandeamento cromossômico têm sido bastante utilizadas na citogenética e citotaxonomia especialmente em fanerógamas. Entre os corantes utilizados nessas técnicas, os fluorocromos CMA e DAPI são os mais amplamente empregados em citogenética de plantas, principalmente na forma de dupla coloração, o que tem permitido caracterizar regiões heterocromáticas, revelando um número variável de regiões cromossômicas. Epidendrum L. é provavelmente o maior gênero neotropical de orquídeas, com cerca de 1500 espécies, onde seu alto grau de polimorfismo é especialmente elevado em alguns grupos sul-americanos, como, o complexo Epidendrum secundum, que também apresenta elevada variação cromossômica numérica. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o padrão de bandas heterocromáticas em espécies do gênero Epidendrum e híbridos interespecíficos. Foram analisadas três espécies do gênero Epidendrum, E. fulgens, E. xanthinum e E. secundum. Adicionalmente, foram analisados dois híbridos interespecíficos e seus possíveis parentais, o primeiro E. xanthinum x E. secundum, proveniente de Nova Friburgo, estado do Rio de Janeiro, o segundo E. fulgens e E. secundum, designado aqui como Epidendrum sp. aff. fulgens, encontrado em simpatria com as duas últimas no município de São João do Tigre, estado da Paraíba. Para as análises mitóticas, foram coletadas raízes e submetidas à pré-tratamento com 8-HQ, fixadas em Carnoy e estocadas em freezer a −20ºC, posteriormente digeridas a 37ºC por 30 minutos em solução de celulase e pectinase. As lâminas foram preparadas com uma gota de ácido acético, coradas com CMA e DAPI, e montadas em glicerol e tampão McIlvaine. As melhores metáfases foram capturadas com uma câmera de vídeo Cohu usando o software Leica QFISH. Foram feitas também as medidas cromossômicas e calculados os índices de assimetria, além das análises morfométricas, onde calculou-se em seguida os dados de ACP. Os números cromossômicos variaram de 2n = 24 em E. fulgens até 2n = 64 em Epidendrum sp. aff. fulgens, enquanto o tamanho dos cromossomos de E. secundum variaram desde 0,75 μm no menor cromossomo da população de Atibaia - SP, a 7,10 μm no maior cromossomo da população de Nova Friburgo – RJ. Os cariótipos de todas as espécies apresentaram-se geralmente simétricos, formados por cromossomos metacêntricos e submetacêntricos. Nos terminais de pelo menos um par cromossômico, foram identificadas regiões CMA¬/DAPI+, algumas regiões CMA+/DAPI¬ e CMA0/DAPI¬, estas últimas, sem formar bandas claramente visualizáveis, mesmo após a sobreposição e processamento digital das imagens. Para a população de São João do Tigre, a análise de Agrupamento identificou a formação de três grupos morfologicamente distintos e relacionados, contudo, indicou uma similaridade maior entre o híbrido e E. secundum. Entre os materiais analisados, duas espécies constituem prováveis híbridos interespecíficos, o primeiro proveniente de Nova Friburgo, com 2n = 42 e número cromossômico intermediário aos dois possíveis parentais: E. xanthinum (2n =28) e E. secundum (2n = 56). O segundo em São João do Tigre, Paraíba, onde a análise de números cromossômicos revelou que esta espécie, Epidendrum sp. aff. fulgens (2n = 64), apresentou número cromossômico claramente divergente de ambos os parentais, E. fulgens (2n = 50 + 1B) e E. secundum (2n = 56). O padrão de bandas CMA/DAPI observado no suposto híbrido, com grandes blocos CMA¬/DAPI+ sugere uma clara relação com estas espécies, relação também suportada pelas análises morfométricas. Tanto a variação cromossômica numérica, quanto o padrão de bandas heterocromáticas foram bastante informativos na caracterização de dois híbridos interespecíficos das regiões Sudeste e Nordeste do Brasil. Contudo, o híbrido da região Nordeste, resultante do cruzamento entre E. secundum e E. fulgens de São João do Tigre, apresentou número cromossômico divergente do esperado a partir do cruzamento dos seus supostos parentais, sugerindo a ocorrência de alterações estruturais pós-hibridização.