Detecção de veneno ofídico em sensor SPR

Abstract

Acidentes ocasionados por serpentes ocorrem em todo o mundo e são considerados um agravo à saúde pública. O veneno ofídico é constituído por uma diversidade de substâncias, incluindo diferentes famílias de proteínas as quais carregam muitas toxinas, estas, ao entrarem em contato com o sistema biológico, desencadeiam diferentes atividades fisiopatológicas. No Brasil, o gênero Bothrops é distribuído por todo território nacional bem como é responsável pelo maior número de acidentes. Atualmente, não há testes rápidos disponíveis que constatem a ocorrência de envenenamento ofídico assim como discriminem o gênero causador do acidente. Os biossensores SPR são instrumentos ópticos que detectam em tempo real as interações moleculares que acontecem em sua superfície sensora, local onde uma cobertura de reconhecimento biológico interage com moléculas de interesse existentes na amostra fluídica. Esse evento promove uma mudança no ângulo de refração da luz incidente no biochip. Para o desenvolvimento de um biossensor ideal, o estudo da adsorção é um parâmetro indispensável. Esta pesquisa objetivou implementar uma metodologia baseada em um biossensor SPR para (1) avaliação de reconhecimento específico e inespecífico entre soro antiofídico e veneno, analisando a concentração mínima detectável, (2) a presença ou ausência de interações inespecíficas e (3) a aplicabilidade de modelos de adsorção. O instrumento SPR utilizado é denominado Colbi-VIR; os componentes biológicos presentes no fluido são transportados através de uma bomba peristáltica até o biochip coberto com uma película de ouro de 50nm onde ocorre a adsorção; um processador de sinais mensura a refletividade que é apresentada através do Software “CobiSoft”. Por meio desse estudo foi possível estabelecer a concentração mínima de veneno detectável pelo biossensor, determinar os índices de refração para as distintas concentrações de veneno botrópico utilizadas sobre o soro antibotrópico, assim como compará-los às respostas da interação entre antígenos e anticorpos inespecíficos, observando que o índice de refração foi bem mais baixo, além disso, foi comprovada a aplicabilidade do Modelo de Aproximação de Langmuir por uma exponencial para altas concentrações. Os resultados demonstraram excelente detecção em tempo real das interações entre antígeno e anticorpo na superfície sensora, sendo assim, esta técnica se mostrou promissora para futura aplicação clínica em acidentes ofídicos.